Nečistoće tirzepatida

Nečistoće tirzepatida|Kontrola nečistoće tilpeptida|Prilagođena sinteza nečistoća i potvrda strukture|Znanstveni-peptid

Kontrola nečistoća tirzepatida - za GLP-1/GIP dvostruko-ciljano istraživanje kvalitete lijeka, generičko izvješćivanje o lijekovima. Znanost-Peptid pruža prilagođenu sintezu nečistoća povezanih s tilpeptidom, uključujući delecione peptide, oksidirane nečistoće, proizvode za eksfolijaciju masnih kiselina, dimere itd., sa podacima o strukturnoj potvrdi koji podržavaju vaše Možemo podržati svoju studiju spektroskopije nečistoća sa podacima o strukturnoj potvrdi. Dobrodošli da nas kontaktirate.

Tirzepatid (Tirzepatide) je dvostruki agonist GLP{3}}1/GIP koji je smislio Eli Lilly, a u punom je zamahu ove dvije godine. Ima dobar učinak na snižavanje šećera i snažan učinak na smanjenje tjelesne težine, a nazivaju ga nadograđenom verzijom "čudotvornog lijeka za mršavljenje". Domaći proizvođači peptidnih generičkih lijekova, mnogi zure u to - nakon isteka patenta, tko može prvi trčati kroz kvalitetu istraživanja, tko će imati priliku zgrabiti prvi generik.

 

Međutim, kvalitetu tilpeptida nije tako lako proučavati. Složeniji je od simetikona, s 39 aminokiselina, bočnim lancem masnih kiselina (eikozandioična kiselina) i veznikom. Nečistoće koje se mogu pojaviti tijekom procesa sinteze puno su veće od onih kod običnih peptida. Peptidi koji nedostaju, oksidativne nečistoće, proizvodi odvajanja masnih kiselina, dimeri, nečistoće povezane s linkerom- moraju imati kontrolu, sve moraju biti jasne.

 

Prikupili smo puno iskustva u sintezi složenih peptidnih nečistoća. Specijalizirali smo se za proučavanje tilpeptida i znamo koje su poteškoće u njegovom profilu nečistoća i koje su bitne kontrolne stavke. Možemo prilagoditi sintezu različitih kontrola nečistoća tilpeptida prema vašim potrebama, s podacima o potvrdi strukture i pomoći vam da uspostavite metodu tako da je manja vjerojatnost da će vam se izdati dodatak prilikom podnošenja.

Molekularna struktura tilpeptida određuje da je njegov profil nečistoća mnogo složeniji od profila općih peptida. Kada radimo studije nečistoća, uglavnom se fokusiramo na ove kategorije:

Nedostaje peptid
39 aminokiselina, od kojih bilo koja nedostaje tijekom procesa sinteze, je nečistoća. Vremena zadržavanja nedostajućih peptida na HPLC-u bila su široko raspoređena, s različitim polaritetima nedostajućih peptida na različitim položajima. Neki nedostaju na N-kraju, neki u sredini, a neki blizu mjesta vezanja masne kiseline. Od kupca smo primili narudžbu za 15 peptida koji nedostaju na različitim pozicijama kako bismo lokalizirali sve moguće nečistoće koje nedostaju u njihovom procesu.

Oksidirajuće nečistoće
Met u nizu tilpeptida je osjetljiv na oksidaciju u sulfoksid, a zatim u sulfon. Oksidirane nečistoće često se pojavljuju u studijama stabilnosti i rastu nakon određenog vremena. Napravili smo usporedbu, pod ubrzanim uvjetima tijekom mjesec dana, vrh oksidacije može narasti na više od 0,3%, bez kontrole.

Proizvodi za izbacivanje masnih kiselina
Ovo je nečistoća jedinstvena za tilpeptid. Njegov bočni lanac masne kiseline (eikozandioična kiselina) vezan je za lizin preko poveznice, a ova se modifikacija može djelomično odvojiti tijekom sinteze ili skladištenja, što rezultira uklanjanjem nečistoća-masne kiseline. Problematičnije je to što se odvajanje može dogoditi na različitim mjestima - između masne kiseline i poveznice ili između poveznice i peptida - što rezultira različitim nečistoćama. Sintetizirali smo nekoliko nečistoća-povezanih s masnim kiselinama za naše klijente, u rasponu od potpunog odvajanja do samo malog dijela.

Dimeri/polimeri
Dvije ili više molekula tilpeptida grupiraju se zajedno kako bi formirale dimer ili više. Molekularna težina dimera dvostruko je veća od glavnog vrha, a često je široki vrh na HPLC-u, pa ga je potrebno posebno odvojiti i pročistiti prije nego što se može koristiti kao kontrola. Radili smo pripremu dimera, a bilo je potrebno nekoliko ciklusa pročišćavanja da bi se postigla čistoća veća od 95%.

Nečistoće-povezane s povezivačem
Modifikacija tilpeptida masnom kiselinom koristi poveznicu (npr. -Glu, PEG itd.), a sama poveznica može proizvesti nuspojave tijekom sinteze, stvarajući nečistoće s nedostajućim ili nepotpunim poveznicama. Ova vrsta nečistoće ne nalazi se u uobičajenim peptidima, ali je jedinstvena za tilpeptid, koji treba posebno proučavati.

Deamidirane nečistoće
Asparagin (Asn) i glutamin (Gln) lako se deamidiraju u kiselim uvjetima ili uvjetima zagrijavanja, što rezultira izomerima. Postoji nekoliko Asn i Gln u nizu tilpeptida, a nečistoća deamidacije često se pojavljuje u testu prisilne razgradnje, tako da se kontrolni proizvod mora koristiti za lociranje nečistoće.

Dijastereoizomeri
Tijekom dugolančane sinteze, pojedinačne aminokiseline mogu proći racemizaciju, što rezultira dijastereoizomerima. Sadržaj ove vrste nečistoća obično nije visok, no stručnjaci će se pitati prilikom deklariranja, a za potvrdu je bolje imati kontrolni proizvod.

Mnoge od tih nečistoća ne mogu se kupiti i moraju se sintetizirati po narudžbi. Napravili smo mnogo projekata na prilagodbi tilpeptidnih nečistoća, pokrivajući sve gore navedene kategorije.

Brisanje niza peptida
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, s MS i NMR potvrdom. Sintetizirali smo skup peptida s razmakom od 5 aminokiselina od N-terminala do C-terminala.

Oksidirajuće nečistoće
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% i možemo osigurati LC-MS spektar za potvrdu stupnja oksidacije. Sulfoksid i sulfon se odvajaju HPLC-om, a možemo oboje.

Proizvodi za izbacivanje masnih kiselina
Ovo je jedna od nečistoća s kojima je najteže raditi u tilpeptidu. Lanac masne kiseline može biti potpuno isključen ili može biti djelomično isključen (npr. nedostaje zadnjih nekoliko ugljika). Možemo sintetizirati niz varijanti za različite položaje lanca. U jednom od najsloženijih projekata koje smo radili, kupac nas je zamolio da sintetiziramo nečistoću kojoj nedostaje 8 ugljika u lancu masne kiseline, a trebalo nam je dva mjeseca da to ispravimo.

Dimer
Dimeri nastali unakrsno-vezivanjem ili ne-kovalentnim interakcijama mogu se pripremiti različitim metodama te izolirati i pročistiti kako bi se dobile kontrole visoke čistoće. Dimere je teško pročistiti, ali mi imamo iskustvo da znamo kako odvojiti monomere.

Nečistoće-povezane s povezivačem
Linker (-Glu, PEG, itd.) može nedostajati ili biti nepotpun, što rezultira nizom srodnih nečistoća. Možemo sintetizirati različite varijante s linkerima koji nedostaju, skraćenim linkerima ili neusklađenim linkerima i pomoći vam da izgradite spektre takvih nečistoća.

Deamidirane nečistoće
Za mjesta Asn i Gln u nizu, možemo pripremiti deamidirane kontrole nečistoća prisilnom razgradnjom ili ciljanom sintezom. Razlika u molekularnoj težini nakon deamidacije je samo 1, što nije lako razlučiti pomoću MS, pa obično koristimo NMR ili posebne kromatografske uvjete za potvrdu.

Ostale prilagođene nečistoće
Ako u svom istraživanju pronađete novu nepoznatu nečistoću, možemo vam pomoći analizirati strukturu i sintetizirati je. Pošaljite nam uzorke, mi ćemo napraviti LC-MS analizu, zaključiti strukturu, zatim usmjerenu sintezu, a zatim usporediti vrijeme zadržavanja i maseni spektar da potvrdimo dogovor. Proveli smo ovaj proces mnogo puta i stopa uspješnosti je prilično visoka.

Razvoj i validacija analitičke metode
Prilikom postavljanja HPLC ili LC-MS metode potrebna je kontrola nečistoća za lokalizaciju, određivanje odvajanja, provjeru linearnog raspona i oporavak. Bez kontrole, validaciji metode nedostaje dio. Mnogi klijenti od nas traže da prvo napravimo nekoliko ključnih nečistoća kako bismo postavili metodu, a zatim polako nadoknadimo ostatak.

Heterogena masena spektrometrija
Prilikom deklariranja generičkog lijeka potrebna je sveobuhvatna kvalitativna i kvantitativna analiza procesnih nečistoća i produkata razgradnje. Mjesto, sadržaj i strukturu svake nečistoće potrebno je potvrditi kontrolnim proizvodom. Vidjeli smo da je izjava o informacijama poslana da se ispuni, devet puta od deset nečistoće ovog djela nisu razumjeli.

Studije stabilnosti
U-testima dugoročne stabilnosti i ubrzanim testovima potrebno je utvrditi koji su produkti razgradnje dominantni i kakav je trend sadržaja. Pomoću kontrole nečistoća možemo točno kvantificirati i pratiti. Kupac je ispitivao stabilnost pripravka tilpeptida i otkrio je da vršna vrijednost razgradnje raste vrlo brzo u ubrzanim uvjetima, pa smo to analizirali i sintetizirali pomoću MS-a kako bismo potvrdili strukturu, a zatim je kupac s olakšanjem to prijavio.

Testiranje puštanja serije
Nakon komercijalizacije, svaku seriju API-ja ili formulaciju treba ispitati na predmetnu tvar. Kontrole nečistoća ključni su alati za ispitivanje otpuštanja.

Podaci o generičkim deklaracijama lijekova
Studije nečistoća ključni su dio podataka o podnošenju. Pružanje cjelovitog profila nečistoća i kontrolnih podataka značajno smanjuje rizik od ponovnog izdavanja.

Slučaj 1: farmaceutska tvrtka, program generičkih lijekova tilpeptida
Oni razvijaju generičku verziju tilpeptida i trebaju potpuni set kontrola nečistoća za validaciju metode. Za njih smo prilagodili 12 nečistoća: 5 nedostajućih peptida, 2 oksidirane nečistoće, 1 dimer, 2 proizvoda odvajanja masnih kiselina i 2 nečistoće povezane s linkerom-. Svaki od njih ima čistoću veću od 95%, a prate ga MS i NMR podaci. Voditelj projekta rekao je: "Nečistoće tilpeptida su dvaput veće od drugih peptida, ali možete ih napraviti sve, a podaci su potpuni, što nam štedi puno posla." Kasnije je uspješno završena validacija njihove metode, a sada se pripremaju za deklaraciju.

Slučaj 2: CRO tvrtka, profiliranje nečistoća
Poduzeli su kvalitetan istraživački projekt o tilpeptidu, koji je zahtijevao sveobuhvatnu analizu procesnih nečistoća. Poslali su nam sirove uzorke peptida, a mi smo izvršili LC-MS analizu, zaključili moguće strukture nekoliko nepoznatih nečistoća, zatim ih ciljano sintetizirali i usporedili retencijska vremena i masene spektre, i potvrdili četiri nove nečistoće - dvije od njih bile su povezane s povezivačem-, a dvije su bile varijante odvajanja masnih kiselina. Klijent je upotrijebio te podatke za pročišćavanje profila nečistoća i uspješno prošao klijentovo prihvaćanje.

Slučaj 3: Studije stabilnosti, biotehnološka tvrtka
Ispitivali su stabilnost formulacije tilpeptida i otkrili da se količina proizvoda razgradnje brzo povećava pod ubrzanim uvjetima, ali nisu znali što je to. Analizirali smo uzorak pomoću LC-MS i pretpostavili da se radi o nečistoći deamidacije na određenom Asn mjestu, a zatim smo je sintetizirali na ciljani način i potvrdili usporedbom. Uspostavili su analizu koristeći ovu kontrolu i točno pratili trend produkta razgradnje. Kasnije, kada su podnijeli izvješće, ovaj dio podataka vještaci su istaknuli, a zbog solidnih podataka nije izdana odšteta.

Tilpeptid je popularan proizvod, ali proučavanje nečistoća je delikatan posao, posebno proizvoda za eksfolijaciju masnih kiselina i nečistoća povezanih s linkerom-, s kojima se mnogi proizvođači ne mogu nositi. Ako provodite kvalitetno istraživanje ili generički razvoj tilpeptida i trebate kontrolu nečistoća, slobodno nas kontaktirajte. Puno smo radili, znamo koje su poteškoće i znamo kako ih izvući.