Teška i hidrofobna sinteza peptida

Teška sinteza peptida|Prilagodba hidrofobnog peptida|Teška sinteza peptida|Sinteza klaster sekvence|Znanstveni-peptid

Peptidna sekvenca previše hidrofobna? Lako agregirati? Više parova disulfidnih veza? Usluge Science-Peptide's Difficult Peptide Synthesis i Hydrophobic Peptide Synthesis specijalizirane su za sve vrste "ne mogu to učiniti". 20 godina iskustva, posebne sustave otapala, stabilnu isporuku. Slobodno nas kontaktirajte.

Koje se vrste peptida smatraju "teškima"?
Budući da sam 20 godina u poslu sinteze peptida, vidio sam svakakve teške peptide. Kad nam kupci dođu, pitali su već nekoliko tvrtki, a odgovor koji dobivaju je ili "Ne mogu" ili "Probajte, nema garancije".

Peptid s jakom hidrofobnošću: transmembranska regija, signalni peptid, hidrofobna aminokiselina, kada se sintetizira, skupit će se na smoli, a aminokiselina iza njega neće moći ući.
Peptidi koji se lako agregiraju, poput amiloida i antimikrobnih peptida, gomilaju se prilikom sintetiziranja i začepljuju kolonu nakon pročišćavanja.
Peptidi s više parova disulfidnih veza: više od tri para, jedan pogrešan korak u redoslijedu sparivanja i cijela molekula je uništena.
Dugi peptid: više od 60 aminokiselina, svakim korakom prinos se smanjuje, a na kraju ne ostane ništa.
Složena kombinacija modifikacija: fosforilacija, fluorescencija, ciklizacija i uvjeti koji se međusobno bore.
Možemo ih sve uzeti, a to nije "pokušaj", već "imaj plan".

1. Hidrofobni peptidi: sa posebnim sustavima otapala
Poteškoća hidrofobnih peptida leži u činjenici da se ne mogu otopiti u konvencionalnim otapalima, a kada se sintetiziraju, peptidni lanac se "skupi" na smoli, onemogućavajući ulazak aminokiselina iza njega.

Naše rješenje:
Posebna kombinacija otapala: miješani sustav DMF, NMP, DCM, plus malo tekućeg sredstva za otpuštanje, tako da je peptidni lanac ostao rastegnut.
Optimizacija temperature: neke reakcije su bolje na 40 stupnjeva od sobne temperature, neke se moraju spustiti na 0 stupnjeva, isprobali smo ih jednu po jednu.
Odabir smole: Za hidrofobne peptide koristite smolu visoke topljivosti kako biste ostavili dovoljno prostora za peptidne lance.
Otopljene oznake: Ako ne možete, dodajte hidrofilnu oznaku i odrežite je nakon sinteze.

Pravi slučaj: 35aa transmembranski peptid, hidrofobne aminokiseline čine 70%, kupac je tražio tri tvrtke ne može se učiniti. Promijenili smo sustav otapala i dodali oznaku za otapanje, konačno je čistoća bila 92%, a kupac je glatko obavio studiju strukture.

2. Više parova disulfidnih veza: nema sreće, strategija
Što je više disulfidnih veza, teže ih je upariti. Dva para su u redu, ali tri ili više para i jedan krivi korak i sve je gotovo.
Naša strategija:
Ortogonalna zaštita: Cys se može otvoriti i upariti u koracima koristeći različite zaštitne skupine, kao što su Trt, Acm, tBu.
Optimizacija oksidacijskih uvjeta: oksidacija zrakom, oksidacija glutationa, oksidacija jodom, različite metode za različite peptide.
Intermediate QC: Nakon svakog uparivanja, uzmite uzorak za MS i potvrdite uparivanje prije nego što nastavite.
MS/MS potvrda (izborno): konačni raskid-sa sekundarnom masenom spektrometrijom da se vidi gdje su disulfidne veze zapravo spojene.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >Čistoća 90%, pravilno uparene disulfidne veze, a kristalna struktura je naknadno riješena od strane naručitelja.

3. Peptidi-skloni agregaciji: sintetiziraju se tijekom obrane
Neki se peptidi prirodno vole agregirati, poput amiloidnog proteina i antibakterijskog peptida. Počinju se agregirati kada se sintetiziraju, blokiraju kolonu kada se pročiste i ne mogu se otopiti kada su u ruci.
Naše rješenje:
Pseudoprolin: Pseudoprolin se uvodi na Ser/Thr položaj kako bi se poremetila tendencija agregacije i vratila nakon sinteze.
Segmentna sinteza: Peptidi koji su previše polimerizirani režu se na nekoliko segmenata i sintetiziraju odvojeno, a zatim se na kraju ponovno spajaju.
Optimiziranje uvjeta pročišćavanja: visoka temperatura, kiseli pH, dodavanje organskih otapala kako bi se pronašli uvjeti koji ga čine ne-polimerizirajućim.

4. Složene kombinacije modifikatora: uvjeti bez borbi
Neki peptidi imaju više zahtjeva: fosforilaciju, fluorescentno označavanje i ciklizaciju. Ove izmjene mogu biti u sukobu jedna s drugom - na primjer, fosforilacija je kiselo-fobna, fluorescentno označavanje je svjetlo-fobna, a ciklizacija zahtijeva određeni pH.
Naš pristup:
Dizajn strategije očuvanja: koje podrezivanje napraviti prvo, koje podrezivanje kasnije, osmišljeno unaprijed.
Ortogonalni uvjeti: Uvjeti svakog koraka reakcije ne utječu na već napravljene izmjene.
Intermediate QC: Nakon svakog koraka izmjene, uzmite uzorak kako biste bili sigurni da je učinjeno ispravno prije nego nastavite dalje.

5. Čistoća: Ovisno o tome što s njim radite

Svaki peptid prati HPLC i MS izvješće, čineći podatke o čistoći transparentnima.

1. Ovo radimo već 20 godina
Teška sinteza peptida nije nešto što svatko može učiniti. Tijekom godina bavili smo se mnogim teškim peptidima: transmembranskim proteinima, virusnim fuzijskim peptidima, konotoksinima, amiloidnim proteinima, antimikrobnim peptidima itd. Imamo dobru predodžbu o tome koje su sekvence sklone problemima i koji ih uvjeti mogu spasiti. Barem ne morate isprobati svaki od njih ako dođete k nama zbog teške i hidrofobne peptidne sinteze.

2. Nije "probati", nego "imati program".
Mnoge tvrtke preuzimaju teške peptide i kažu: "Pokušat ćemo, ali ne jamčimo". Ne igramo tako. Prije prihvaćanja narudžbe procijenit ćemo slijed, koliki je udio hidrofobnih aminokiselina, postoji li poznata tendencija agregacije, koliko parova disulfidnih veza te je li modifikacija složena ili ne. Nakon procjene, reći ćemo vam: koja je stopa uspješnosti i koliko dugo traje ciklus.

Ne primamo narudžbe koje se ne mogu izvršiti, a narudžbe koje smo preuzeli moramo predati.

3. Specijalizirani sustavi otapala za hidrofobnost
Hidrofobni peptid je naša jača strana. Ako se uobičajeno otapalo ne može otopiti, promijenit ćemo otapalo; ako konvencionalna temperatura ne reagira, prilagodit ćemo temperaturu; ako konvencionalna smola ne izdrži, promijenit ćemo smolu. Tu je i solubilizirajuća oznaka kao povratni izlaz.

4. Više parova disulfidnih veza, korak-po-korak
Ako postoji više od tri para disulfidnih veza, pristupit ćemo -po-korak: prvi korak je zaštititi A i otvoriti prvi par; zaštititi B i otvoriti drugi par; zaštititi C i otvoriti treći par. Nakon svakog koraka uzimamo uzorke za MS i potvrđujemo uparivanje prije nego što krenemo dalje. Konačno, MS/MS će biti razbijen i verificiran, a podaci će vam biti dani bez vašeg nagađanja.

5. Kontrola kvalitete: podaci na svakom koraku
Kontrola kvalitete teških peptida mora biti pažljivija:
Srednji QC: Nakon svakog fragmenta i svakog koraka modifikacije, prvo izmjerite čistoću i molekularnu težinu.
Krajnji proizvod: HPLC za čistoću, MS za molekularnu masu.
Test topljivosti: Navedite preporučena otapala i metode solubilizacije, kako ne biste dobili peptide koji se ne otapaju.
Radi teške i hidrofobne peptidne sinteze, podaci govore sami za sebe, svaki se korak može pratiti.

• Oblik isporuke: liofilizirani prašak, epruvete za centrifugiranje ili bočice.
• Popratni dokumenti: COA (HPLC profil + MS spektar), izvješće o sintezi (opcija).
• Izborni testovi: sadržaj peptida, endotoksin, vlaga, aminokiselinski sastav, test topljivosti.
• Prilagođeno pakiranje: porcioniranje i označavanje prema vašim zahtjevima.
• Svaki teški i proizvod hidrofobne sinteze peptida pregledava se kako bi se osiguralo da je redoslijed ispravan i da je čistoća na standardu prije nego što se pošalje.

Bilo da su vas drugi odbili ili to ne možete učiniti u vlastitom laboratoriju, možete razgovarati s nama. Ako tražite znanstveni-peptid za tešku i hidrofobnu sintezu peptida, barem ne morate pokušavati jedan po jedan.

Trebaš mi reći:
Sekvenca peptida (ili ciljna informacija)
Je li to prije učinio netko drugi? Kakav je rezultat?
Koliko (miligrama)
zahtjevi čistoće

Kada to želite?

Pružamo vam procjenu izvedivosti i ponudu programa u roku od 24 sata.